淺談呼吸道合胞病毒感染及其檢測(cè)方法

在過(guò)去的半年時(shí)間里，我們經(jīng)歷了一場(chǎng)新型冠狀病毒的感染，隨后緊接著又是甲型流感的襲擊，剛剛平息不久又迎來(lái)一波呼吸道合胞病毒感染。對(duì)于新冠和甲流大家都不再陌生，那么對(duì)于呼吸道合胞病毒，我們又了解多少呢？今天就和大家一起聊一聊呼吸道合胞病毒感染。

呼吸道合胞病毒概述

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial  virus, RSV)屬于副黏病毒科，肺炎病毒亞科，肺炎病毒屬。RSV和其他肺炎病毒與副黏病毒科病毒的區(qū)別主要在于基因的數(shù)量和排序不同，以及凝血素和神經(jīng)氨酸酶活性的缺失。該病毒于1956年首次從感冒的黑猩猩身上分離出來(lái)，并于1957年利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在肺炎患兒的呼吸道分離出了該病毒。目前只鑒定出一種RSV血清型，根據(jù)兩個(gè)主要的抗原組可將其分為A、B兩種亞型。RSV病毒顆粒大體上呈球狀，但在低溫電子斷層掃描觀察發(fā)現(xiàn)其形態(tài)具有多態(tài)性——球裝、絲狀或兩者兼有。

RSV流行病學(xué)和傳播

RSV主要通過(guò)飛沫傳播、直接或間接接觸感染者的分泌物或污染物來(lái)進(jìn)行傳播。有研究顯示：在溫帶氣候下，低溫和高濕的環(huán)境中能明顯增加RSV的活性。在全球范圍內(nèi)，RSV感染全年均可發(fā)生。根據(jù)流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示：在同一地區(qū)同一季節(jié)，RSV的A、B型會(huì)交替流行。

RSV感染臨床表現(xiàn)

RSV是引起嬰幼兒急性下呼吸道感染的最主要病原體。臨床癥狀主要包括：咳嗽、低燒和流涕等上呼吸道感染癥狀。常見(jiàn)的下呼吸道感染包括：支氣管炎、細(xì)支氣管炎和肺炎。對(duì)RSV病毒的相關(guān)研究匯總分析估計(jì)：2015年，全球由RSV引起的急性下呼吸道感染的5歲以下兒童有3310萬(wàn)，320萬(wàn)相關(guān)住院，56000例院內(nèi)死亡。2019年，全球由RSV引起的急性下呼吸道感染的5歲以下兒童有3300萬(wàn)，360萬(wàn)相關(guān)住院，26300例院內(nèi)死亡。其中95%的RSV引起的急性下呼吸道感染發(fā)病和97%的RSV引起的急性下呼吸道感染相關(guān)死亡發(fā)生在中低收入國(guó)家。而且，RSV在5歲以下兒童中的疾病負(fù)擔(dān)是流感的2-3倍。

對(duì)于成人，RSV引起嚴(yán)重感染的危險(xiǎn)因素主要有：患心肺疾病的人群（如慢阻肺、心臟病、哮喘等）以及免疫力受損的患者（如腫瘤和移植患者）。

RSV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)項(xiàng)目有哪些？

那么診斷RSV感染可以做哪些實(shí)驗(yàn)室檢查呢？RSV病毒感染呼吸道上皮細(xì)胞，可在所有類型的呼吸道分泌物中發(fā)現(xiàn)。通常，各種上呼吸道標(biāo)本即可用于RSV病毒的檢測(cè)。目前南院檢驗(yàn)科常用的RSV病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)項(xiàng)目有：呼吸道合胞病毒抗原檢測(cè)（膠體金法）；七項(xiàng)呼吸道病毒抗原檢測(cè)（免疫熒光法）；甲型、乙型流感及呼吸道合胞病毒核酸聯(lián)合檢測(cè)；13種呼吸道病原體多重檢測(cè)。

一、呼吸道合胞病毒抗原檢測(cè)（膠體金法）

呼吸道合胞病毒抗原檢測(cè)是利用能夠特異性識(shí)別呼吸道合胞病毒F蛋白的單克隆抗體，以膠體金免疫層析法檢測(cè)呼吸道合胞病毒，且僅對(duì)標(biāo)本中呼吸道合胞病毒A型和B型有特異性反應(yīng)。本方法優(yōu)點(diǎn)是：可快速檢測(cè)呼吸道合胞病毒，可作為呼吸道合胞病毒感染的輔助診斷。局限性是：陰性結(jié)果不能排除流感病毒感染；陽(yáng)性結(jié)果不能確定病毒亞型。

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二、七項(xiàng)呼吸道病毒抗原檢測(cè)（免疫熒光法）

該檢測(cè)方法使用熒光直接標(biāo)記的病毒抗原特異性的鼠單克隆抗體，快速篩查7種常見(jiàn)的呼吸道病毒，包括：流感病毒A，流感病毒B，副流感病毒1，2，3，呼吸道合胞病毒以及腺病毒。利用熒光顯微鏡觀察結(jié)果，陽(yáng)性細(xì)胞顯示蘋果綠熒光；陰性細(xì)胞被Evans Blue 染成紅色。

三、甲/乙型流感及呼吸道合胞病毒核酸聯(lián)合檢測(cè)（Xpert Xpress Flu/RSV Assay）

Xpert Xpress Flu/RSV Assay 用于體外定性檢測(cè)甲型流感病毒、乙型流感病毒和RSV病毒RNA。GeneXpert全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)是整合樣本提取、核酸純化和擴(kuò)增、實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄PCR（將RNA模板轉(zhuǎn)化為DNA）、臨床樣本的靶序列檢測(cè)等功能于一體的全自動(dòng)分析系統(tǒng)。Xpert Xpress Flu/RSV Assay中的引物和探針用于擴(kuò)增和檢測(cè)編碼以下蛋白基因的單一序列：甲型流感基質(zhì)蛋白（M）、甲型流感堿性聚合酶（PB2）、甲型流感酸性蛋白（PA）、乙型流感基質(zhì)蛋白（M）、乙型流感非結(jié)構(gòu)性蛋白NS）、RSV A 和RSV B 核蛋白殼。GeneXpert全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)包括儀器、個(gè)人計(jì)算機(jī)以及用于運(yùn)行檢測(cè)和查看結(jié)果的預(yù)裝軟件。每次檢測(cè)都需要使用裝有靶標(biāo)特異性試劑的一次性GeneXpert試劑盒，來(lái)進(jìn)行RT‐PCR和PCR過(guò)程。由于試劑盒是單獨(dú)容器包裝，因此可最大程度減少樣本間的交叉污染。Xpert Xpress Flu/RSV Assay 包含用于檢測(cè)和鑒別具有呼吸道感染體征和癥狀患者NP拭子中的甲型流感病毒、乙型流感病毒和RSV病毒RNA所需的試劑。試劑盒還包含樣本處理質(zhì)控（SPC）和探針檢查質(zhì)控（PCC）。SPC用于觀察靶序列是否被正確提取或處理及監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)中是否存在抑制劑。PCC用于驗(yàn)證試劑再水化、檢測(cè)盒中PCR管的灌裝、探針完整性和染料穩(wěn)定性。本實(shí)驗(yàn)可快速鑒別患者感染的季節(jié)性病毒類型。

四、13種呼吸道病原體多重檢測(cè)

該項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)原理為：針對(duì)目標(biāo)靶點(diǎn)設(shè)計(jì)特異性引物，采用多重PCR技術(shù)，在一個(gè)反應(yīng)管中同時(shí)對(duì)多個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行特異性擴(kuò)增，最終通過(guò)毛細(xì)電泳分析，根據(jù)擴(kuò)增片段長(zhǎng)度的不同對(duì)特定的靶點(diǎn)進(jìn)行區(qū)分。本項(xiàng)目檢測(cè)的病原體包括：甲型流感病毒、甲型流感病毒H1N1、甲型流感病毒H3N2、乙型流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、偏肺病毒、冠狀病毒（不包括新冠病毒）、呼吸道合胞病毒、博卡病毒、腺病毒、肺炎支原體、衣原體。

面對(duì)呼吸道合胞病毒感染，上海市東方醫(yī)院南院檢驗(yàn)科開展了多種方法的病原學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目，為患者提供高質(zhì)量醫(yī)療服務(wù)，臨床醫(yī)生可兼顧快速和敏感性兩方面選擇檢測(cè)方法，這樣有助于對(duì)患者的快速處置，選擇合理的治療方案，并有效控制病毒感染。

供稿：倪麗君、軒乾坤

審核：郭建

編輯：鐘霓